
斑馬魚(yú)原位雜交
發(fā)布時(shí)間:
2021-12-24
原位雜交:在研究DNA分子復制原理的基礎上發(fā)展起來(lái)的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過(guò)氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點(diǎn),應用帶有標記的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交,然后可用放射自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀(guān)察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來(lái)探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱(chēng)為原位雜交。
使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。
RNA原位核酸雜交又稱(chēng)RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術(shù)。
其基本原理是:在細胞或組織結構保持不變的條件下,用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),所形成的雜交體 (Hybrids)經(jīng)顯色反應后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀(guān)察其細胞內相應的mRNA、rRNA和tRNA分子。
RNA原位雜交技術(shù) 經(jīng)不斷改進(jìn),其應用的領(lǐng)域已遠超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為最有效的分子病理學(xué)技術(shù),同時(shí)在分析低豐度和罕見(jiàn)的mRNA表達方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。
FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現已從實(shí)驗室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域?;驹硎菬晒鈽擞浀暮怂崽结樤谧冃院笈c已變性的靶核酸在退火 溫度下復性。
通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標記探針是其中最常用的一類(lèi)核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平 的分析。熒光標記控針不對環(huán)境構成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀(guān)察分析,因而可同時(shí)使用多個(gè)探針,縮 短因單個(gè)探針?lè )珠_(kāi)使用導致的周期過(guò)程和技術(shù)障礙。