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斑馬魚(yú)基因敲降思路

發(fā)布時(shí)間:

2019-06-28

 基因敲降項目的一般工作思路：

1）首先分析目標基因在斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育早期是否有表達（如果沒(méi)有表達，則根本不存在敲降問(wèn)題）。
2）設計并安排實(shí)驗（RT-PCR）檢測目標基因在胚胎發(fā)育早期的表達情況（目的在于確認目標基因在胚胎發(fā)育早期有表達，同時(shí)在有表達的情況下建立檢測目標基因表達下調的檢測方法）。實(shí)際上，即使數據庫中有描述該基因在胚胎發(fā)育早期有表達，也要開(kāi)展此項實(shí)驗。
3）在確認該基因在胚胎發(fā)育早期有表達的情況下，再設計MO，然后訂購MO（阻斷翻譯型MO-ATG和/或阻斷原始mRNA剪接型MO-S）。在胚胎注射MO-S以驗證MO-S是否能有效阻斷目標基因原始mRNA的剪接（請注意，斑馬魚(yú)領(lǐng)域內的專(zhuān)家已經(jīng)達成MO-ATG不再要求驗證其活性。實(shí)際上是源于MO-ATG無(wú)法進(jìn)行活性驗證，故而我們推薦使用CRISPRi策略從抑制目標基因轉錄的水平上建立基因敲降的方法）。